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        GreenTaq

        2 × Green Taq Master Mix (P101-5)

        产品简介

        本产品包含最新升级版的Taq DNA Polymerase,比普通Taq酶具备更高的保真度。Mix中混合有dNTP以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,提高了通量和结果的重现性。体系中加入的?;ぜ潦沟?/span>Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。本品提供含有电泳缓冲液和绿色染料的版本,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体,并适用于本公司CloneUFOTM  快速克隆试剂盒。

         

        产品组成

        P101-55 ml

        P101-5 15 ml

        P101-550 ml

        2 × Green Taq  Mix

        5 ml

        15 ml

        50 ml

         

        储存条件

        -20°C保存。

         

        单位定义

        用活化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物,74°C 30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。

         

        质量控制

        核酸外切酶残留检测:20 μL本品和0.6 μg λ-Hind III74℃下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

        核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

        大肠杆菌残留 DNA 残留检测:50 μL 体系中,以 ddH 2 O 为模板,扩增 E. coli 16 s rDNA 基因。30 个循环后进行 1%琼脂糖凝胶电泳,染色,

        无扩增条带。

        功能检测:以 10 ng λDNA 为模板扩增 30 个循环,1%琼脂糖凝胶电泳,染色,可见 250bp ~ 20 kb 各自单一的条带。

         

        实验方案

        1. 反应体系配制

        3

         

        *不同模板最佳反应浓度有所不同,下表为50 μl反应体系推荐模板使用量:

        2

         

        2. PCR反应条件设置

        1

        * 退火温度需要根据引物退火温度调整,一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

         

        引物设计注意事项

        1.引物3’端最后一个碱基选择CG;

        2.引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;

        3.引物3’端尽量避免出现发夹结构;

        4.引物Tm值控制在55°C-65°C之间;

        5.引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;

        6.引物GC含量控制在40%-60%之间;

        7.正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

         

         

         

         

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