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        Q101

        ATGStart? qPCR SYBR Green Master Mix (Q101)

         

        ATGStart™ qPCR SYBR Green Master Mix (Q101)

         

        产品简介

        本产品可用于SYBR® Green I嵌合荧光法荧光定量PCR,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点。核心组分ATGStartTaq DNA Polymerase是基于化学修饰的热启动DNA聚合酶,配合针对SYBR® Green I 嵌合荧光法而优化的最适Buffer,可以抑制非特异性扩增,从而显著提高扩增效率,适用于进行高灵敏度探针法qPCR检测反应。本产品是一种含有SYBR® Green I2×预混液,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。

         

        产品组成

        1. 包含dNTP,Mg2+,ATGStartTaq DNA PolymeraseSYBR® Green I等。

         

        储存条件

        -20°C保存。

         

        实验流程

        1.qPCR管中配置如下混合液

        反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整:

        1. 一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在终浓度0.1-1.0 mΜ范围内调整引物浓度。
        2. qPCR灵敏度极高,建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响。推荐将模板稀释后加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性。
        3. 如模板类型为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

         

        2.按照以下条件进行qPCR反应

        *1. ATGStartTaq DNA Polymerase需要热激活处理以恢复酶活,请设置PCR反应预变性条件为95℃ 8 min。如果模板的GC含量较高,可将预变性时间延长至10 min。

        *2. 延伸时间请根据您使用的Real-time PCR仪所需的数据采集最短时间自行调整:使用ABI 77007900H时至少30 sec;使用ABI 70007300时至少31 sec;使用ABI 7500时至少34 sec;使用ABI StepOnePlus时至少10 sec。

         

        应用案例

        使用ATG的ATGStartTM qPCR SYBR Green Master Mix 与V公司同类产品同时检测COVID-19 N基因质粒,平行检测5个浓度梯度,由上图可见,ATG的ATGStartTM qPCR SYBR Green Master Mix灵敏度与平台较高。

         

        质量控制

        纯度检测:所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、核酸残留。

        功能检测:以国家标准SARS-COV-2 RNA的逆转录产物稀释液为模板,扩增3个基因,扩增曲线在批次间的产品中相近。

         

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