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        R105

        ATGScript? One Step RT-qPCR SYBR Green Kit(R105)

        ATGScript™ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit (R105)

         

         

        产品简介

        ATGScript One Step RT-qPCR SYBR Green Kit专为以RNA为模板(如RNA病毒)的定量PCR检测而设计,使用基因特异性引物(GSP),逆转录和qPCR反应在一管内完成,不需要额外的开管移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。本试剂盒整合ATGScript Reverse Transcriptase以及热启动的ATGStart Taq DNA Polymerase的优越性能,可用于SYBR® Green I嵌合荧光法荧光定量PCR,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点,配合针对SYBR® Green I 嵌合荧光法而优化的最适Buffer,可以抑制非特异性扩增,从而显著提高扩增效率,适用于高灵敏度SYBR® Green I嵌合荧光法RT-qPCR检测反应。

        产品组成

        a. 包含SYBR Green,dNTP Mix,Mg2+

        b. ATGScriptTM Reverse Transcriptase、RNasin 以及热启动的 ATGStartTM Taq DNA Polymerase。

        c. 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,使用ABI7900HT/7300Real-Time PCR SystemStep One Plus时使用50 × ROX Reference Dye 1;ABI7500,7500Fast Real-time PCR System,Stratagene Mx3000P使用50 × ROX Reference Dye2; Roche,Bio-Rad Real Time PCR仪不必使用ROX。

         

        储存条件

        -20°C保存。

         

        质量控制

        纯度检测:所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、核酸残留。

        功能检测:以国家标准SARS-COV-2 RNA稀释液为模板,扩增3个基因,扩增曲线在批次间的产品中相近。

         

         

        实验流程

        1 在RNase-free离心管中配制如下混合液

        反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整:

        一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在0.1-1.0 μM范围内调整引物浓度。

        ▲PCR灵敏度极高建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响。推荐将模板稀释后(如稀释至25 μl/样本)加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性。

        扩增产物长度请选择在80 bp–200 bp范围内

         

        2 按下列条件进行One Step RT-qPCR反应

         

        标准程序(可获得最高的扩增灵敏度)

         

        快速程序(可满足大部分应用)

        a.对于具有复杂二级结构或高GC区域的模板,将逆转录温度提高到55 ℃,有助于提高扩增效率和灵敏度。

        b.延伸时间请根据您使用的Real Time PCR仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整:使用ABI 77007900HT时至少30秒:使用ABI 70007300时至少31秒:使用ABI 7500时至少34秒。

        c实际使 Real Time PCR仪是否支持快速扩增循环,初次尝试请进行预实验确认。

         

        3 反应结束后确认Real Time PCR的扩增曲线,进行标准曲线制作等。

         

         

         

         

         

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